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技术文献

绵羊降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析试剂盒说明书

YUEDUCISHU:575    FABUSHIJIAN:2018/4/2 14:47:49

 绵羊降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析试剂盒说明书

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中绵羊降钙素基因相关肽(CGRP)水平。用纯化的

绵羊降钙素基因相关肽(CGRP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入降钙素基因相关肽(CGRP),再与 HRP 标记的降钙素基因相关肽(CGRP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的降钙素基因相关肽(CGRP)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中绵羊降钙素基因相关肽(CGRP)浓度。

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

绵羊降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析试剂盒操作步骤

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

48 ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

24 ng/L 4 号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

12 ng/L 3 号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

6 ng/L 2 号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

3 ng/L 1 号标准品 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,

然后再加待测样品 10μl(样品*终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽

量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此

重复 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。

7. 温育:操作同 3。

8. 洗涤:操作同 5。

9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟.

10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结:

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标

准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

即为样品的实际浓度。

绵羊降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析试剂盒注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间*

控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,*做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值

大于标准品孔*孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计

算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照绵羊降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析试剂盒说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 个月

 

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